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视频显微镜调试的注意事项

作者:1,2,3,4,5 起源: 日期:2018-6-25 16:24:26 人气:10

1••。正式实验时,应分辨以阳性对照与阴性对照把持实验条件,待检样品应作一式二份,以保证实验成果的正确性••。有时本底较高,阐明有非特异性反响,可采用羊血清¶••⊿兔血清或BSA等封闭••。

2.在ELISA中,进行各项实验条件的选择是很重要的,其中包含:

(1)固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙烯¶••⊿聚苯乙烯¶••⊿聚丙酰胺和纤维素等••。其情势可以是凹孔平板¶••⊿试管¶••⊿珠粒等••。目前常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板••。不管何种载体,在应用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反响,视察其显色反响是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好••。

(2)包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,请求纯度要好,吸附时一般请求PH在9.0~9.6之间••。吸附温度,时间及其蛋白量也有必定影响,一般多采用4℃18~24小时••。蛋白质包被的合适浓度需进行滴定:即用不同的蛋白质浓度(0.1¶••⊿1.0和10μg/ml等)进行包被后,在其它实验条件雷同时,视察阳性标本的OD值••。选择OD值大而蛋白量少的浓度••。对于多数蛋白质来说通常为1~10μg/ml••。

(3)酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份)••。然后再固定其它条件或采用“方阵法”(包被物¶••⊿待检样品的参考品及酶标记抗体分辨为不同的稀释度)在正式实验系统里正确地滴定其工作浓度••。

(4)酶的底物及供氢体的选择:对供氢体的选择请求是价廉¶••⊿安全¶••⊿有明显地显色反响,而本身无色••。有些供氢体(如OPD等)有潜在的致癌作用,应注意防护••。有条件者应应用不致癌¶••⊿敏锐度高的供氢体,如TMB和ABTS是目前较为满意的供氢体••。底物作用一段时间后,应参加强酸或强碱以终止反响••。通常底物作用时间,以10-30分钟为宜••。

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